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溶解尿液中无定形尿酸盐晶体的方案

  
发布时间:2022-09-26 08:26:38 来源:ku游体育备用网址线路 作者:ku游体育备用网址线路下载
  

  无定形尿酸盐晶体可掩盖常规尿液分析期间的重要发现。没有标准化的协议来最小化它们的影响。

  我们测试了210个尿液样本。三个标本的红细胞(RBC)或白细胞(WBC)计数高。五十六个标本形成无定形尿酸盐。用50mM氢氧化钠(NaOH)以1:2和/或1:4稀释度处理这些标本中的沉积物。我们在不同的温度下用晶体加热了22个标本。

  在具有酸性pH值的浓缩尿液中形成的无定形尿酸盐晶体。加入50mM NaOH溶解无定形尿酸盐,揭示了潜在细菌和酵母的存在,但WBC和RBC计数显着降低。将未纺丝的试样预热至60°C90秒,溶解大多数无定形尿酸盐。

  消除无定形尿酸盐晶体的方案是在测试前对试样进行预热。在沉积物中添加50 mM NaOH可溶解无定形尿酸盐以增强细菌和酵母的可见性,但对WBC和RBC具有有害作用。

  对尿液进行显微镜分析以鉴定与疾病相关的重要元素的存在,例如红细胞(RBC),白细胞(WBC),管型,酵母和细菌。尿液中晶体的存在可以是病理性的或良性的。许多晶体形成特定的可识别形状,例如草酸钙和三磷酸盐。在浓缩的尿液中可以形成小的,无形的晶体,特别是当标本冷藏时。1在酸性尿液中,这些晶体被称为无定形尿酸盐,尿酸盐是钠,钾,镁或钙的尿酸盐。2-5在碱性尿液中,它们被称为无定形磷酸盐。虽然无定形晶体是非病理性的,但它们可能类似于细菌,并且可以掩盖显着的发现(图 1A和1C).从宏观上看,它们使尿液看起来朦胧或浑浊。

  无定形尿酸盐晶体掩盖了显微分析中的重要发现。一个。来自标本12的尿沉渣。二.用50mM NaOH处理后的标本12显示细菌的存在。C.含有无定形晶体、酵母和细菌的尿沉淀物。四.用50mM NaOH处理后,很容易看到细菌和酵母细胞。显微照片以400×放大倍率拍摄,明场显微镜检查,无污渍。氢氧化钠,氢氧化钠。

  无定形磷酸盐可以用2%的乙酸快速溶解,但不能用热量溶解。酸处理会破坏红细胞,但会增强白细胞和上皮细胞的外观。无定形尿酸盐不溶于乙酸,但据报道可溶于碱。我们检索了几本尿液分析教科书和临床和实验室标准协会尿液分析批准的指南,没有发现关于使用哪种碱性溶液或其对尿液中其他形成元素的影响的具体说明的参考。1-9该项目的目标是制定一种方案,安全快速地溶解尿沉渣中的无定形尿酸盐,并确定其局限性。

  我们从一所大学的健康成年人和一家步入式诊所的志愿者那里收集了总共207份随机尿液样本。标本冷藏20至48小时。在测试之前,它们被允许达到环境温度。生化分析是在Uritrak分析仪上使用Multistix 10SG(西门子)读数进行的。接下来,将每个样品的12mL在400 RCF下离心5分钟。丢弃上清液,剩余的0.5mL沉积物可用于分析。对于WBC和RBC评估,从医院的住院患者收集3个尿液样本,并将其转移到UA防腐剂管(BD Vacutainer)中。标本在收集后3天内进行测试。

  氢氧化钠(NaOH)是实验室中使用的常用碱,通常以不同的浓度提供。我们选择50 mM NaOH(0.2%NaOH),因为它是一种弱碱,不会对健康造成重大危害,只需要使用常规实验室个人防护设备。10它可以在环境温度下存储在台面上,使其成为一种方便的显微镜工具。

  通过将10μL混合良好的尿沉渣加入10μL0.9%盐水中,对沉渣进行显微镜分析,使稀释度为1:2。无定形尿酸盐的存在分为 0、1+ 或 2+,如图 2.我们用10μL50mM NaOH处理10μL尿沉渣,稀释1:2;用15μL50mM NaOH处理5μL尿沉渣,以1:4稀释。每种稀释液中无定形尿酸盐的存在分为0,1 +或2 +。在极少数情况下,使用1:5稀释液。为了研究NaOH对形成元素的影响,用无定形尿酸盐的标本加入细菌和酵母。血尿和白细胞尿患者标本用于评估红细胞和白细胞计数。使用 IBM SPSS 版本 28 执行统计分析。

  无定形尿酸盐晶体定量分级图式的微观评价。A. 0级。B. 1+年级。C. 2+年级。显微照片以400×放大倍率拍摄,明场显微镜检查,无污渍。

  使用确定为SH-20的特定保存标本评估NaOH对RBC的影响。生化条显示血液3+,pH 6.0,比重1.015。标本中没有无定形尿酸盐。使用重力将7 mL样品沉淀,并除去3.4 mL上清液。将剩余的沉积物悬浮液高速涡旋10秒并充电到血细胞计数器,并在5个RBC方块中计数细胞。为了测试50 mM NaOH对RBC的影响,将100μL沉淀物悬浮液加入100μL的50mM NaOH中。将溶液涡旋5秒并充电到血细胞计数器,并在5个RBC方块中计数细胞。用NaOH处理的细胞数量乘以2以校正稀释,并与对照组进行比较。

  使用确定为SH-9的特定保存标本评估NaOH对WBC的影响。生化条显示3+白细胞,2+血,pH 6.0,比重1.025,蛋白质2+,葡萄糖1+。标本中没有无定形尿酸盐。将8.5 mL样品在400 RCF下离心5分钟,倾析上清液以保留1.2 mL沉积物。沉积物被涡旋10秒钟。取出一小块白色细胞,再次涡旋标本10秒,并充电至血细胞计数器,并将细胞计数在5个红细胞方块中。为了测试50 mM NaOH对WBC的影响,将100μL沉积物悬浮液加入100μL的50mM NaOH中。将溶液涡旋5秒并充电到血细胞计数器,并在5个RBC方块中计数细胞。用NaOH处理的细胞数量乘以2以校正稀释,并与对照组进行比较。在第二个保存的尿液样本上重复分析,鉴定为SH-3。生化条带分析显示白细胞3+,血液1+,pH 6.0,比重1.025,蛋白1+。没有无定形尿酸盐。使用重力沉淀7.7 mL样品,并除去6.6 mL上清液以产生沉积物悬浮液。如上所述处理沉积物悬浮液,并在5个RBC方块中计数细胞。

  使用 SAS 9.4 执行统计分析。使用配对t检验(依赖性t检验)来确定在应用NaOH之前和之后样品均值之间是否存在差异。使用正态分布的拟合优度检验来分析试样之间的差异。

  通过在4°C下冷藏6~10 mL尿液过夜,测试温度对宏观浊度的影响。形成无定形尿酸盐的标本根据通过它们读取印刷品的能力被分级为具有1至3 +浊度,如图 3.将标本在55°C,60°C和65°C下孵育90秒,并评估其浊度等级的变化。

  无定形尿酸盐晶体定量分级图式的宏观评价。0 = 清晰,1+ = 标本后面易于阅读的打印件,2+ = 无法读取打印件,3+ = 不透明。

  我们在白天的随机时间从178名随行成年人那里收集了207份尿液样本。56个标本在冷藏后形成无定形尿酸盐晶体。形成无定形尿酸盐晶体的试样的平均pH值为6.0,平均比重为1.029(表 1).进行了独立样品t检验,以确定产生和不产生晶体的样品的pH值和比重之间的均值是否存在差异。平均而言,形成尿酸盐晶体的样品的pH值(平均值= 6.009,SE = 0.0201)在统计学上低于未形成尿酸盐晶体的样品的pH值(平均值= 6.510,SE = 0.0549)。该差异在t(184)= −8.57,P.001时显着;此外,它代表了一个大尺寸的效应,r= .53。比重分析证明了相反的趋势:形成尿酸盐晶体的样品的比重(平均值= 1.029,SE = 0.0002)在统计学上高于未形成尿酸盐晶体的样品的比重(平均值= 1.019,SE = 1.0004)。该差异在t(200)= 17.84,P.001时显着;此外,它代表了一个大尺寸的效应,r= .78。形成晶体的试样的pH值较低,比重较高。

  图 1比较加入等量50mM NaOH之前和之后的2个样品的尿沉渣照片。NaOH溶解了无定形尿酸盐,并允许细菌和酵母的更好可见性。

  我们定量了完全溶解晶体所需的50 mM NaOH的量。图 2显示了所使用的分级等级。23%的试样中的无定形晶体在加入等量的50mM NaOH(×2处理)后完全溶解;通过×4治疗,这一结果增加到98%。只有1个测试的试样需要1:5的处理才能完全溶解无定形晶体。

  进行反复测量方差分析以确定标准治疗之间的等级是否存在差异。晶体等级结果的描述性统计量显示在表 2.Mauchly的测试表明,球形度的假设被违反了,χ2(2)=34.02,P.05,为NaOH处理的主要效果。因此,使用Greenhouse-Geisser的球形度估计值(ε= 0.68)校正了自由度。结果表明,不同处理间非晶晶体的数量存在统计学差异,F(1.4, 75.0) = 288,P.01,ω2= 0.97。对所有3种治疗之间的成对比较的术后分析也表明结果具有统计学意义。这一发现证实,用50mM NaOH处理导致晶体数量显着减少。

  使用来自2例尿路感染个体的尿液标本来评估50 mM NaOH对WBC的影响。平均而言,与未处理的等分试样相比,NaOH处理后的SH-9等分试样具有低得多的WBC含量(平均值= 1.8,SE = 0.38)(平均值= 54.4,SE = 2.13;t[29] = 25.19,P.0001,r= .98)。采用正态分布拟合优度检验分析等分试样间差异,未违反正态性假设,P.250。NaOH对WBC的数量有有害影响,如图 4.

  在NaOH处理之前和之后,SH-9(A)中的WBCs和SH-20(B)含量中的红细胞的配对谱(n = 30)。红线表示平均细胞计数。氢氧化钠;红细胞,红细胞;白细胞,白细胞。

  对SH-3等分试样进行了相同的分析。平均而言,与未处理的等分试样相比,NaOH处理后的SH-3等分试样具有低得多的WBC含量(平均值= 48.2,SE = 3.24)(平均值= 126.7,SE = 3.44;t[29] = 14.30,P.0001,r= .94)。采用正态分布拟合优度检验分析等分试样间的差异,未违反正态性假设,P.164。NaOH对WBC的数量有有害影响。

  使用血尿患者的尿液样本来评估50mM NaOH对红细胞的影响。平均而言,与未处理的等分试样相比,NaOH处理后的SH-20等分试样具有低得多的红细胞含量(平均值= 8.3,SE = 0.73)(平均值= 276.3,SE = 12.58;t[29] = 21.5,P.0001,r= .94)。采用正态分布拟合优度检验分析等分试样间差异,未违反正态性假设,P.250。NaOH对红细胞的数量有有害影响,如图 4.

  无定形尿酸盐预计在加热到约60°C时溶解。5我们使用中所示的分级模式,测试了形成无定形尿酸盐的试样的温度和时间。图 3.将22个宏观浊度等级为2或3的尿液标本在不同温度下在水浴中孵育90秒。所有标本在60°C孵育时浊度降低至少1个单位;其中19个标本显示至少减少2个单位。当在55°C下孵育时,18个标本显示出至少2个单位的宏观浊度降低。图 5显示试样宏观升温的效果(图 5A)和显微镜下(图 5B和5C).

  温度对无定形尿酸盐的影响。一个。标本23在升温前后。二.在显微镜下,无定形晶体掩盖了未经处理的标本的可见性。C.离心前试样预热时沉积物的微观视图。显微照片以400×放大倍率拍摄,明场显微镜检查,无污渍。

  无定形晶体没有临床意义;然而,它们类似于细菌,可以掩盖尿液显微镜检查中的关键发现。尿液分析教科书指出,无定形尿酸盐可以溶解在弱碱和弱热中,但它们没有提供这样做的方案。在这里,我们提供了这些协议和安全预防措施10,11(图 6).

  当浑浊的尿液具有微粉红色外观、高比重和酸性 pH 值时,应怀疑无定形尿酸盐晶体。沉积物是粉红色的,因为尿红素的粘附。这种颜色通常被称为“砖粉”。1,2,5当尿液标本升温至60°C时,无定形尿酸盐会迅速溶解。这种治疗对尿液中形成的元素没有危害性。从程序的角度来看,请注意,必须在离心前进行加热,因为沉积物太浓缩而无法仅通过加热溶解。在尿沉渣中加入50mM NaOH是快速溶解无定形尿酸盐的安全有效方法。它有助于细菌和酵母的鉴定;但是,它对红细胞和白细胞是有害的。这项研究的一个局限性是,没有关于50 mM NaOH对管型的影响的信息。用于评估红细胞和白细胞的标本数量有限,但最终表明,当用NaOH处理标本时,细胞计数将不准确。

  常规尿液分析显微镜检查的最佳标本是新鲜的,但这并不总是可行的。冷藏是分析前储存的常用方法,可促进晶体形成。分析人员应怀疑具有高比重和酸性pH值的浑浊标本具有无定形尿酸盐,并在离心前预热以溶解晶体。我们发现50mM NaOH是一种弱碱,可以安全地添加到尿沉渣中,以快速确认潜在细菌和酵母的存在。该测量是医学实验室科学家进行尿液显微镜分析的附加工具。


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